Spermatogeneza u mężczyzny z całkowitym usunięciem USP9Y

Delecje w regionie czynnika azoospermii AZFa na ludzkim chromosomie Y, a dokładniej w regionie, który obejmuje specyficzny dla ubikwityny peptydazę 9, połączony przez Y genu USP9Y, są związane z niepłodnością związaną z oligospermią i azoospermią. Scharakteryzowaliśmy szczegółowo skreślenie w AZFa, co skutkuje brakiem USP9Y u normalnego mężczyzny i jego brata i ojca. Związek tej dużej delecji z prawidłową płodnością pokazuje, że USP9Y, dotychczas uważany za kandydujący gen dla niepłodności i azoospermii, nie odgrywa kluczowej roli w rozmnażaniu męskim. Wyniki te sugerują, że nie jest konieczne rozważenie USP9Y podczas badania chromosomu Y niepłodnych lub niepłodnych mężczyzn pod kątem mikrodelecji.
Wprowadzenie
Delecje dystalnego regionu euchromatycznego chromosomu Y (Yq11) są związane z niewydolnością plemnikotwórczą.1 Locus, zwany czynnikiem azoospermii (AZF), rozciąga się od proksymalnego do dystalnego końca q regionu chromosomu Y2 i zawiera trzy regiony : AZFa, AZFb i AZFc. Szacuje się, że przedział AZFa obejmuje 792 kb i obejmuje dwa szeroko ekspresjonowane geny funkcjonalne: USP9Y (gen połączony przez Y kodujący specyficzną dla ubikwityny peptydazę 9) i DDX3Y (polistyren 3 DEAD [Asp-Glu-Ala-Asp], Geny sprzężone z Y dawniej znane jako DBY) .3,4 Dokładna rola genów kandydujących w regionie AZFa jest w dużej mierze nieznana, ze względu na wyjątkowo rzadką naturalną mutację specyficzną dla pojedynczego genu. Całkowita delecja regionu AZFa jest stosunkowo rzadka (delecje w obszarze q chromosomu Y występują u mniej niż 2% mężczyzn z defektami spermatogennymi), ale są dobrze udokumentowane i zawsze kojarzone z zespołem wyłącznie komórkowym Sertoli.5
USP9Y obejmuje 170 kb DNA, składa się z co najmniej 46 egzonów i zajmuje niewielką część przedziału AZFa. Koduje ono białko, o którym donosi się, że działa jako C-terminalna hydrolaza ubikwityny i jest powszechnie eksprymowane. 7. Usunięcia atakujące USP9Y były związane z azoospermią lub ciężką oligospermią. [8] Niedawno znaleziono dwie częściowe delecje u mężczyzn z łagodniejszym fenotypem, oligoastenoteratozoospermia , co sugeruje niewielką rolę tego genu w spermatogenezie
Metody
Pacjent
Pacjent, 42-letni mężczyzna, poddał się analizie spermatologicznej i genetycznej podczas oceny niepłodności, której szukał on i jego partner po poronieniu. On i inni członkowie jego rodziny wyrazili świadomą zgodę na uczestnictwo w tym badaniu, zgodnie z wymogami instytucjonalnej komisji rewizyjnej szpitala w Sienie.
Analiza nasienia
Trzy spermiogramy uzyskano dla pacjenta w odstępach 3-miesięcznych. Zebrano próbki nasienia, a objętość, pH, stężenie plemników i ruchliwość oceniano zgodnie z wytycznymi Światowej Organizacji Zdrowia (WHO) 10. Brat i ojciec nie dostarczyli próbek nasienia.
Badanie ultrastrukturalne ejakulowanego plemnika przeprowadzono za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej. Próbki nasienia utrwalano w utrwalaczu zimnego Karnovsky ego i utrzymywano w 4 ° C przez 2 godziny. Naprawiono próbki nasienia płukano w 100 mM buforze kakodylowym (pH 7,2) przez 12 godzin, po utrwaleniu w 1% buforowanym tetratlenku osmu przez godzinę w 4 ° C, i odwodniono i osadzono w Epon-Araldite
[więcej w: węzeł virchowa, zirid zamiennik, koncentracja życia wokół picia przykłady ]